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SnapGene安装教程 SnapGene使用教程

2022-06-12   作者:本站   来源:本站整理   浏览:522   评论:0  

SnapGene是世界知名的分子克隆工具,拥有多种克隆工具,包括限制型克隆、TA克隆、网关克隆、融合克隆、NEBuilder 高保真克隆等,内置了超过2700个经过仔细注释的质粒和序列文件,包括来自所有主要供应商的常用克隆载体,工程师可以直接拿来使用进行克隆,比如使用SnapGene模拟Clontech克隆,将一个或者多个NDA片段插入质粒,使用Gateway 克隆可以在没有限制性内切酶的情况下构建质粒,它通过重组插入DNA 片段。为了方便大家的使用,小编精心制作了SnapGene安装教程和使用教程供大家参考学习,具体如下文:

SnapGene中文破解版 v5.2.0 附使用教程
  • 授权方式:免费软件
  • 软件类型:国产软件
  • 软件语言:简体中文
  • 软件大小:50.35 MB
  • 更新日期:2022-04-20
  • 运行环境:WinXP, Win2003, Vista, Win7, Win8, Win10

SnapGene安装教程

1、下载本站为您带来的SnapGene中文破解版软件压缩包,解压得到“setup.exe”安装程序和“fix”破解文件及

2、双击安装程序,弹出安装路径选择窗口,设置安装路径,然后点击Next

3、查阅SnapGene的安装许可证协议,点击I Agree进入下一步

4、根据您的需要勾选组件,点击Next

5、选择开始菜单文件夹,使用默认的即可,点击Install

6、等待安装进度完成

7、安装完成后,直接关闭安装向导,这里先不要启动软件,下面我们要执行软件的破解工作

SnapGene破解教程

1、打开fix文件夹,将“SnapGene.exe”破解补丁复制到安装根目录下替换源文件,默认根目录为【C:\Program Files\SnapGene】

2、这样我们就完成SnapGene中文破解版软件的安装,启动后就可以免费无限制使用了

SnapGene使用说明

限制性克隆使用说明

限制性克隆是一种常见的克隆技术,其中限制性内切酶用于制备插入片段和用于连接的载体。

SnapGene 为模拟限制性克隆提供了一个简单的界面。如果您已经有一个程序,那么模拟将只需要几秒钟。如果克隆程序存在设计缺陷,则可以发现并纠正错误。

限制性克隆技巧

对于许多应用,传统的限制性克隆仍然是最好的方法。一些简单的技巧将有助于确保您的克隆顺利进行。

一、一般技巧

首先,在程序的每一步都要小心。从长远来看,这种方法可以节省时间。

确保 DNA 非常干净。准备载体或切除要插入的片段时,从大约 2 μg DNA 开始。

每次酶促反应后,用离心柱纯化 DNA。在 40 – 45 μl 10 mM Tris (pH 8.5) 中洗脱 DNA,然后进行下一个反应。(在用凝胶纯化 DNA 片段之前,无需使用离心柱。)

为了最大限度地提高效率,请尽量减少程序中的步骤数。例如,将平末端片段克隆到平端载体位点(如 SmaI 位点)比克隆到用 Klenow 或 T4 DNA 聚合酶平端的位点效果更好。

如有疑问,请使用凝胶纯化 DNA 片段。更清洁的起始材料将产生更好的结果。

二、准备向量

限制性克隆最常见的问题是起始载体在操作后被回收。这个问题有两个原因:载体的不完全消化,以及切割载体与自身的重新连接。下面描述的技巧将最大限度地减少这些影响。

确保载体的消化完成。使用过量的限制性内切酶(2 μg DNA 约 20 U),消化约 4 小时。如果需要用两种具有不同最佳反应缓冲液的酶切割载体,请依次进行消化,并在其间进行离心柱纯化。

消化载体(如果合适,还可以钝化)后,用磷酸酶处理:在 37°C 下 1 小时处理 5' 突出端,如果 DNA 有任何平端或 3' 突出端,则在 50°C 下处理 1 小时。

用离心柱去除磷酸酶。通常不需要对载体进行凝胶纯化,因为磷酸酶处理会使产生的任何额外 DNA 片段失活。

使用载体,确保消化和磷酸酶反应完成。彻底反复涡旋混合物,不要让任何液滴逃脱酶处理。涡旋后短暂旋转是个好主意,以确保没有液滴留在试管侧面。

三、准备插入的片段

对于插入片段的制备,不完全消化不是一个严重的问题,因为片段的部分恢复是可以接受的。您可以使用相对较短的消化时间,对于双重消化,您可以使用对一种或两种酶不理想的反应缓冲液。

用凝胶纯化插入的片段。除了去除不需要的或未完全消化的 DNA 外,该过程还去除了酶和小分子。 使用透照仪观察 DNA 条带时,请勿使用 312 nm 或以下的短波长紫外光,因为 DNA 会受到严重破坏。请改用 360-365 nm 紫外灯。

如果插入的片段是通过 PCR 生成的,请在进行任何限制性消化之前用凝胶或离心柱对其进行纯化。如果您计划将平末端 PCR 片段(由聚合酶如 Pfu 生成)克隆到经过磷酸酶处理的载体中,请确保您的 PCR 引物具有 5'-磷酸。

四、结扎和转化

使用磷酸酶处理的载体,进行控制连接,其中插入的片段被省略。这种对照连接应该产生非常少的转化子,因为只有环状 DNA 分子才能有效转化 大肠杆菌 ,并且如果不连接磷酸化片段,载体就不会发生再环化。

如果 DNA 只有粘性末端,则在室温下连接约 1 小时。如果 DNA 有任何平末端,在室温下连接约 4 小时并使用高浓度 T4 连接酶。

五、小量制备和诊断文摘

如果与对照连接相比,插入片段的连接获得的转化体多于对照连接,那么您的克隆几乎肯定有效,通常只需进行 3-4 次小量制备即可。

在对小量制备进行诊断限制性消化时,始终将起始载体作为参考标准。

模拟融合克隆使用说明

In-Fusion ®克隆

Clontech 的In-Fusion 克隆是一种用于创建无缝基因融合的非常通用的方法。SnapGene 是第一个模拟此过程的软件。

对于 In-Fusion 反应,线性化载体与一种或多种具有重叠末端的 PCR 产物混合。

SnapGene 通过自动化引物设计简化了 In-Fusion 克隆。 要计划 In-Fusion 反应,只需选择您希望融合的 DNA 片段,SnapGene 就会选择合适的引物。

Tags:SnapGene 责任编辑:admin
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